桔梗ISSR反应体系的建立和优化

• 作者: 于营 张庆田 王志清 邵财 郭靖
• 来源期刊: 时珍国医国药
• 学科: 农学
• 关键词: 桔梗 ISSR-PCR 正交设计 体系优化 引物筛选
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 国药鉴别
• 页码范围: 1396-1399
• 页数: 4页
• 分类号: S567
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0805.2014.06.045

摘要

目的 建立并优化桔梗ISSR-PCR反应体系和扩增程序.方法 采用正交试验和单因子试验,对ISSR反应体系主要因子(dNTPs、Taq酶、引物、Mg2+、模板)进行筛选.之后通过单因子试验,进行引物退火温度、循环次数的筛选.结果 桔梗ISSR-PCR的最佳反应体系(20μl)为:dNTPs 0.25mmol/L、Taq酶1.0U、引物0.30μmol/L、Mg2+ 1.50mmol/L、模板DNA10ng.利用此反应体系从54条引物中筛选出12条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物,确定了引物UBC853[序列为(TC)8RC]的最佳退火温度为55℃和循环次数为45次.结论 建立的桔梗ISSR-PCR反应体系,经过白、紫花桔梗共20份样品检验,证明该体系具有稳定性和可靠性,可用于桔梗遗传多样性研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邵财	中国农业科学院特产研究所	34	39	3.0	5.0
2	郭靖	中国农业科学院特产研究所	43	148	6.0	9.0
3	王志清	中国农业科学院特产研究所	19	84	6.0	8.0
4	张庆田	中国农业科学院特产研究所	44	219	7.0	13.0
5	于营	中国农业科学院特产研究所	24	77	5.0	8.0