金花茶查尔酮合成酶基因CnCHS的克隆及遗传转化研究

• 作者: 周兴文 朱宇林 李纪元
• 来源期刊: 植物研究
• 学科: 农学
• 关键词: 金花茶 查尔酮合成酶 表达载体 转基因植株
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 327-332
• 页数: 6页
• 分类号: S685.14
• 语种: 中文
• DOI: 10.7525/j.issn.1673-5102.2015.03.002

摘要

根据已发表的金花茶查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)基因(CnCHS)序列设计全长扩增引物,以金花茶花瓣总cDNA为模板进行PCR扩增,成功获得了该基因cDNA全长.将扩增所得全长产物连接PMD 18-T载体后转化大肠杆菌E.coli DH5α,提取质粒后经酶切、测序鉴定后,将其与双元表达载体pCAMBIA1300连接,成功构建了CnCHS基因的正义表达载体pCAM-CnCHS.将该重组表达载体转化农杆菌EHA105后,利用农杆菌介导法将CnCHS基因转入烟草,获得转基因烟草18株.利用PCR法及Southern blotting对所获得的转基因植株进行鉴定,结果显示CnCHS基因成功整合到烟草基因组中,阳性率达67％,并获得了单拷贝转基因植株.这些结果表明本研究成功构建了金花茶CnCHS基因对烟草的遗传转化体系,为深入研究CnCHS基因的功能及其对花色的调控效应奠定了基础.