靶向髓样分化蛋白-2特异性抗炎多肽的优化

• 作者: 吴晓凤 翁珣 谭燕 闫红
• 来源期刊: 感染、炎症、修复
• 关键词: MD-2特异拮抗多肽 突变多肽库 抗炎
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 145-151
• 页数: 7页
• 字数: 5811字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-8521.2015.03.005

摘要

目的:对原始多肽即靶向髓样分化蛋白-2(MD-2)拮抗多肽T6、T11进行突变多肽库的构建、筛选和功能鉴定,以获得具有更高抗炎活性的多肽.方法:以前期合成的可阻断MD-2与内毒素(LPS)结合但效率不高的原始多肽T6和T11序列为基础,每次随机突变相邻的3～5个氨基酸,保留剩余氨基酸,并同时在肽链的氨基端和羧基端引入额外的两个氨基酸,构建大容量的噬菌体突变肽库;再用全长的MD-2蛋白进行靶向淘选获得特异结合的多肽.最后用细胞实验和动物实验验证所获特异多肽的抗炎效果:①用获得的多肽200 μg/ml分别孵育巨噬细胞和人单核白细胞2h,再用内毒素(LPS)1μg/ml刺激6h.以单纯细胞培养液培养的细胞和LPS刺激6h的细胞作对照.②C57小鼠腹腔注射获得的多肽200 μg/ml,1h后腹腔注射LPS 400 μg/ml,6h后取血.以腹腔注射生理盐水1 ml或LPS的小鼠作对照.每组5只小鼠.采用ELISA法测定各组细胞培养上清和各组小鼠血清的肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)的表达水平.结果:成功构建出原始多肽T6和T11序列为基础的突变肽库,用全长的MD-2蛋白进行靶向淘选获得特异结合多肽A8、H2、F5、H5、H9,通过细胞实验筛选得到有抑炎效果的多肽2条(A8、H2),可以明显抑制LPS所致细胞分泌TNF-α和IL-6水平的增高.动物实验发现只有1条多肽(H2)可以明显抑制LPS所致小鼠血清TNF-α和IL-6水平的增高.结论:成功构建了突变肽库,并从中筛选出一条具有高效抗炎效应的多肽.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	闫红	第三军医大学大坪医院野战外科研究所麻醉科	31	100	6.0	8.0