siRNA干扰NF-κB家族成员表达抑制人肝癌HepG2细胞表达NKG2DLs

• 作者: 吴秉毅 宋朝阳 李玉华 蔡宋浩 贺艳杰 郭坤元 陈心彤 黄宇贤 龙慧
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 舒尼替尼 肝细胞癌 干扰RNA HepG2细胞 NF-κB家族成员
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 专题报道
• 页码范围: 696-702
• 分类号: R735.7|R730.54
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2015.06.004

摘要

目的:探讨舒尼替尼诱导人肝癌HepG2细胞表达的自然杀伤细胞2族成员D配体(natural killer group 2 member D ligands,NKG2DLs)与核因子kappa B (nuclear factor B kappa,NF-κB)信号通路之间的相互作用.方法:常规体外培养HepG2细胞,利用实时荧光定量PCR检测1μmol/L舒尼替尼处理HepG2细胞24 h前后NF-κB基因家族成员mRNA的表达情况,利用计算机辅助设计并合成NF-κB1、NF-κB2和RelB siRNA引物,通过脂质体法将目的基因siRNA转染于HepG2细胞,荧光显微镜观察转染情况,实时荧光定量PCR检测干扰效率,Western blotting检测siRNA转染前后HeG2细胞内NF-κB1、NF-κB2和RelB蛋白表达,流式细胞术检测siRNA前后HepG2细胞NKG2DLs表达率.结果:实时荧光定量PCR结果显示,舒尼替尼处理HepG2细胞后,NF-κB1、NF-κB2和ReIB mRNA表达水平升高,主要以NF-κB2 mRNA和RelB mRNA升高为主.荧光显微镜观测siRNA转染后HepG2细胞红色荧光表达率约为60％,干扰效率达95％以上.siRNA转染后HepG2细胞内NF-κB1、NF-κB2和Re1B蛋白表达水平明显下降,siRNA转染+药物组NKG2DLs表达率明显低于药物处理组(P＜0.05).结论:首次揭示了舒尼替尼通过NF-κB旁路途径诱导肿瘤细胞表达NKG2DLs.