miR-223敲减慢病毒的构建

• 作者: 关晓慧 张欣 王宝利
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 微RNAs 慢病毒属 RNA干扰 慢病毒源性载体 miR-223
• 年，卷（期）: 2015,（7）
• 所属期刊栏目: 细胞与分子生物学
• 页码范围: 717-720
• 页数: 4页
• 分类号: Q524.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.11958/j.issn.0253-9896.2015.07.004

摘要

目的：构建miR-223敲减慢病毒，为进一步研究miR-223的功能提供工具。方法采用Invitrogen公司miR-RNAi在线设计工具，根据miR-223成熟体序列设计了一对互补寡核苷酸片段,退火产物连接至pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR载体，经酶切连入pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体，构建了miR-223敲减慢病毒质粒，利用293T细胞将其包装成病毒，并感染ST2细胞，观察感染效率并用qRT-PCR检测miR-223成熟体表达。结果酶切鉴定及测序结果显示成功构建了miR-223敲减慢病毒载体，miR-223敲减慢病毒包装并感染靶细胞，表达绿色GFP荧光蛋白的细胞约占细胞总数的80%~90%，病毒滴度为1×109 PFU/mL，感染效率达90%。感染miR-223敲减慢病毒的细胞miR-223表达量（0.31±0.03）低于阴性对照（1.00±0.09），为阴性对照的31%，差异有统计学意义（n=3，t=15.091，P＜0.05）。结论成功构建了miR-223敲减慢病毒，为进一步研究miR-223的功能准备了条件。