百子莲茎尖分生组织蛋白双向电泳体系的建立

• 作者: 孙一凡 张洁 张荻 申晓辉
• 来源期刊: 上海交通大学学报（农业科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 百子莲 茎尖分生组织 蛋白提取 蛋白酶抑制剂 双向凝胶电泳
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 页码范围: 43-52
• 页数: 10页
• 分类号: S682.32
• 字数: 8348字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/J.ISSN.1671-9964.2015.03.007

摘要

以‘蓝色大花’百子莲(Agapanthus praecox ssp.orientalis ‘Big blue’)茎尖分生组织为材料,对比研究了不同提取与裂解方法制备蛋白样品以排除多酚、多糖及核酸物质对蛋白双向电泳体系(Two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)的干扰.提取过程采用TCA/丙酮沉淀法和超声波破碎法;蛋白裂解过程中分别使用苯甲基磺酰氟(Phenylmethanesulfonyl Fluoride,PMSF)和乙二胺四乙酸(Ethylene Diamine Tetraacetic Acid,EDTA)、Cocktail(广谱性)蛋白酶抑制剂、核酸酶Nuclease Mix和2-D Clean-Up蛋白纯化试剂盒.制备的各蛋白样品经过7 cm IPG (pH 3～10)胶条上样、电泳后发现,使用TCA/丙酮沉淀法提取蛋白,裂解液中加入Cocktail蛋白酶抑制剂裂解后,用2-D Clean-Up试剂盒所制备的样品其双向凝胶电泳图谱效果最好,获得蛋白点数量最多,且蛋白等电点pI主要分布于4～8之间.随后,应用分辨率更高的24 cm IPG (pH 4～7)胶条进行电泳效果的验证,蛋白点在凝胶的2个方向上均得到了较好地分离,经过ImageMaster 2-D Platinum5.0软件分析后共检测到有效蛋白点820个.本研究初步建立了百子莲茎尖分生组织蛋白双向凝胶电泳体系,为后续开展百子莲属植物蛋白质组学研究提供了重要的技术保障.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张荻	上海交通大学农业与生物学院	157	1845	23.0	35.0
2	张洁	上海交通大学农业与生物学院	187	1538	20.0	32.0
3	申晓辉	上海交通大学农业与生物学院	31	234	9.0	14.0
4	孙一凡	上海交通大学生命科学技术学院	1	4	1.0	1.0