大鲵虹彩病毒主衣壳蛋白MCP基因DNA疫苗的构建及其免疫效果

• 作者: 刘文枝 周勇 张琳琳 张雪萍 曾令兵 曾宪辉 范玉顶 陈倩
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 大鲵 虹彩病毒 主衣壳蛋白 DNA疫苗 免疫保护率
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1055-1067
• 页数: 13页
• 分类号: Q785|S941
• 字数: 8366字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1118.2015.15099

摘要

根据大鲵虹彩病毒(Chinese giant salamander iridovirus, GSIV)主衣壳蛋白(major capsid protein, MCP)基因序列设计特异性引物,经 PCR 扩增得到 MCP 基因编码框1392 bp 全长序列,将其定向克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组质粒并命名为pcDNA-MCP。将pcDNA-MCP质粒转染大鲵肌肉细胞系(GS-M),间接荧光免疫染色结果显示, MCP蛋白可在GS-M细胞中表达,且转染后72 h的表达量显著高于转染后48 h；收集转染后72 h的GS-M细胞,经Western blot检测,可检测到MCP蛋白的特异性表达。将真核表达质粒pcDNA-MCP以20μg/尾的剂量经背部肌肉注射免疫健康大鲵(Andrias davidianus),分别在免疫后第1、3、5、7、14、21、28、35天随机从实验组与对照组中采样,尾静脉采血进行外周血血细胞计数、白细胞分类计数及测定血清中和抗体效价。结果表明,免疫大鲵体内红细胞、中性粒细胞和单核细胞数量明显增加,红细胞数在第5天极显著高于对照组(P<0.01)；中性粒细胞(neutrophil)分类百分比从第3天开始升高,第5天达到峰值(26.33±1.04)%,极显著高于对照组(P<0.01)；单核细胞(monocyte)的变化趋势和中性粒细胞相似,第7天达到峰值(15.83±0.76)%,极显著高于对照组(P<0.01)。随后淋巴细胞大量增殖,第28天淋巴细胞分类百分比达到峰值(68.33±1.53)%,极显著高于对照组(P<0.01)。血清中和试验结果表明,免疫大鲵体内产生了抗 MCP蛋白的抗体,免疫后第28天抗体效价最高[1︰(370.01±31.55)]。真核质粒pcDNA-MCP在免疫大鲵的肌肉、肝、脾和肾的组织表达检测结果显示,免疫接种后第1、3、5、7、14、21、28天大鲵的肌肉、肝、脾和肾组织中均存在真核质粒的分布；RT-PCR结果显示,免疫后第7天和28天,在大鲵的上述组织中均有目的基因的表达。攻毒感染试验结果显示,免疫组大鲵相对免疫保护率可达73.3%。本研究为真核表达质粒 pcDNA-MCP 作为潜在候选疫苗应用于大鲵虹彩病毒病的预防和控制奠定了前期基础。