大鲵虹彩病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 周勇 周群兰 孙建滨 孟彦 张辉 曾令兵 肖艺 高正勇
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 大鲵 虹彩病毒 主要衣壳蛋白 TaqMan实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 页码范围: 772-778
• 分类号: S941
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1231.2012.27923

摘要

利用PCR技术扩增出大鲵虹彩病毒(giant salamander iridovirus,GSIV)主要衣壳蛋白(MCP)编码区长度为1 392 bp的片段,克隆到pMD19-T载体上,构建重组质粒pMD 19-T-MCP.经PCR鉴定确认正确后,以10倍梯度稀释pMD19-T-MCP重组质粒,作为标准模板进行TaqMan实时荧光定量PCR扩增,制作标准曲线,建立了大鲵虹彩病毒的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法.制作的标准曲线有极好的线性关系,且线性范围宽,相关系数为0.990 19.组内重复试验的CT值标准偏差为0.52％.检测结果显示,该方法对大鲵虹彩病毒的检测有高度的特异性,与锦鲤疱疹病毒、弗氏柠檬酸杆菌、嗜水气单胞菌以及鲤上皮瘤细胞基因组DNA之间均无交叉反应,特异性好,检测总DNA灵敏度为10个病毒核酸分子拷贝数,约1.1×10-3 pg/μL病毒核酸,较之常规PCR的敏感度高出约1 000倍.研究建立的大鲵虹彩病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强,对大鲵虹彩病毒病的快速诊断与病毒病原定量检测有重要意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曾令兵	中国水产科学研究院长江水产研究所	56	582	14.0	22.0
2	周群兰	中国水产科学研究院淡水渔业研究中心	25	212	9.0	14.0
3	张辉	中国水产科学研究院长江水产研究所	24	310	10.0	17.0
4	孟彦	中国水产科学研究院长江水产研究所	23	306	10.0	17.0
5	周勇	中国水产科学研究院长江水产研究所	36	264	9.0	15.0
6	肖艺	中国水产科学研究院长江水产研究所	5	70	2.0	5.0
7	高正勇	华中农业大学水产学院	4	124	4.0	4.0