大鲵虹彩病毒MCP蛋白在杆状病毒表达系统中的表达与纯化

• 作者: 周小愿 张星朗 杨平凹 贾秋红 韩亚慧 高宏伟 高志
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 大鲵虹彩病毒 主要衣壳蛋白 杆状病毒表达系统 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1271-1279
• 页数: 9页
• 分类号: S94
• 字数: 5498字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1118.2017.16319

摘要

为研制基于杆状病毒表达系统的大鲵虹彩病毒(Chinese giant salamander iridovirus,CGSIV)新型亚单位疫苗,将CGSIV主要衣壳蛋白(major capsid protein,MCP)基因克隆至杆状病毒穿梭载体pFastBac1质粒中,构建了重组质粒pFastBac-MCP.转化E.coli DH10Bac感受态细胞,经PCR筛选和测序获得了阳性重组杆粒rBacmid-MCP,在昆虫细胞转染试剂介导下将该重组杆粒转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒.重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞,经超薄切片电镜观察,可见大量重组杆状病毒存在于细胞中.按不同感染复数(MOI=2、5、10)将重组杆状病毒感染Sf9细胞进行CGSIV MCP的表达.SDS-PAGE检测结果表明,在MOI=10时,目的蛋白的表达量最高;间接免疫荧光观察结果显示,目的蛋白在感染细胞中得到表达,且分布在细胞表面.以抗CGSIV MCP单抗为抗体制备的免疫磁珠纯化目的蛋白并利用兔抗CGSIV MCP多抗血清检测目的蛋白的生物学活性.SDS-PAGE和Western blot结果显示,纯化的目的蛋白纯度很高,而且具有抗原活性,能够被兔抗大鲵虹彩病毒MCP多抗血清识别.利用杆状病毒表达系统成功进行了CGSIV MCP的表达,并应用免疫磁珠法进行了目的蛋白的纯化,为CGSIV新型亚单位疫苗的研制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周小愿	中国水产科学院黄河水产研究所	17	81	5.0	7.0
2	韩亚慧	中国水产科学院黄河水产研究所	13	55	5.0	6.0
3	张星朗	中国水产科学院黄河水产研究所	14	64	5.0	7.0
4	贾秋红	中国水产科学院黄河水产研究所	13	53	4.0	6.0
5	高宏伟	中国水产科学院黄河水产研究所	14	59	5.0	6.0
6	高志	中国水产科学院黄河水产研究所	5	9	2.0	2.0
7	杨平凹		2	1	1.0	1.0