大鼠细小病毒 H-1株和 KRV 株双重 PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 付瑞 卫礼 岳秉飞 李晓波 王吉 王淑菁 贺争鸣
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 大鼠细小病毒 H-1 KRV 双重PCR
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 46-52
• 页数: 7页
• 分类号: R-33
• 字数: 3569字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671.7856.2015.006.010

摘要

目的：建立大鼠细小病毒H-1和KRV株双重PCR方法并对方法进行初步应用。方法根据NCBI发表的H-1（NC＿001358）和KRV（U790330）基因组序列分别设计特异引物，以H-1和KRV 病毒DNA为模板建立双重PCR方法，对方法进行优化后验证方法的敏感性和特异性；经口感染大鼠，分为H-1和KRV单独感染组和混合感染组，感染后第2，4，6，8，10天采集大鼠粪便，第10天处死所有大鼠，采集心、肝、脾、肺、肾和盲肠内容物等组织，用建立的方法对粪便和组织样本进行检测。结果建立的双重PCR方法以H-1和KRV为模板能够分别扩增出183 bp和302 bp 2个条带，敏感性验证显示能够检测到的最低H-1量为3.8 pg／mL，最低KRV量为0.73 pg／mL；在以小鼠微小病毒、犬细小病毒和猫细小病毒为模板时无任何条带扩增出，特异性良好。感染第2天在所有大鼠粪便中均检测到病毒核酸，感染大鼠均无明显临床症状，感染第10天采集组织，H-1在各组织的检出率分别是心50％（4／8），肝50％（4／8），脾62.5％（5／8），肺50％（4／8），肾37.5％（3／8），盲肠内容物62.5％（5／8），且单独感染组检出率高于混合感染组；KRV在各组织的检出率分别是心0（0／8），肝25％（2／8），脾87.5％（7／8），肺12.5％（1／8），肾25％（2／8），盲肠内容物62.5％（5／8），混合感染组检出率高于单独感染组。结论建立的H-1和KRV双重PCR方法能够高效的检测大鼠粪便及组织中的病毒感染，可作为实验动物国家标准的有力补充。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	岳秉飞	中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所	117	385	11.0	14.0
2	贺争鸣	中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所	100	337	9.0	14.0
3	付瑞	中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所	33	93	6.0	8.0
4	李晓波	中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所	23	46	4.0	6.0
5	王吉	中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所	24	62	5.0	6.0
6	卫礼	中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所	12	31	3.0	5.0
7	王淑菁	中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所	24	39	3.0	5.0