沉默信息调节因子1对胆管癌细胞生物学特性的作用

• 作者: 丁希伟 廖婉玉 张斌 张舒 方诚 杨燕 邹晓平
• 来源期刊: 中华消化杂志
• 关键词: 胆管上皮癌 沉默信息调节因子-1 RNA 干扰 细胞增殖 细胞凋亡 细胞运动
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 论 著
• 页码范围: 542-548
• 页数: 7页
• 字数: 6297字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-1432.2015.08.009

摘要

目的：了解沉默信息调节因子1（SIRT1）在胆管癌细胞中的表达水平，探讨其对胆管癌细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响。方法采用实时定量 PCR 和 Western 印迹法比较人胆管癌细胞QBC939和 HuCCT1与正常胆管上皮细胞 HIBEpiC 中 SIRT1 mRNA 和蛋白的表达。将 QBC939和HuCCT1分成阴性对照组、转染序列1组和转染序列2组，分别转染阴性对照小干扰 RNA 、针对 SIRT1的小干扰 RNA 序列1和小干扰 RNA 序列2，采用实时定量 PCR 和 Western 印迹法鉴定干扰效果。转染后应用细胞计数试剂盒和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力；采用流式细胞术检测细胞凋亡率；采用Transwell迁移实验检测细胞迁移能力。采用 Western 印迹法检测凋亡相关蛋白生存素、B 细胞淋巴瘤‐2基因相关 X 蛋白（Bax）基因、剪切型多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP），以及上皮标志物上皮型钙黏蛋白和间质标志物神经型钙黏蛋白、波形蛋白的表达情况。统计学处理采用 t 检验。结果胆管癌细胞 QBC939和 HuCCT1中 SIRT1的 mRNA 表达水平分别比正常胆管上皮细胞 HIBEpiC 升高（3．30±0．43）和（4．55±0．50）倍，差异均有统计学意义（t ＝7．29、9．79，P 均＜0．05）；胆管癌细胞中SIRT1的蛋白表达水平升高与 mRNA 相似。转染 SIRT1小干扰 RNA 后，胆管癌细胞中 SIRT1 mRNA和蛋白表达水平显著降低。 HuCCT1细胞的转染序列1组和转染序列2组的细胞生存率在转染后72 h分别为（19．72±1．39）％和（27．48±2．67）％，均低于阴性对照组的（84．65±3．18）％，差异均有统计学意义（t＝37．42、27．54，P均＜0．05）；HuCCT1细胞中转染序列1组和转染序列2组早期凋亡细胞比例分别为（19．43±1．72）％和（19．80±0．86）％，均高于阴性对照组的（5．43±0．31）％，差异均有统计学意义（t＝11．30、22．23，P均＜0．05）；HuCCT1细胞中转染序列1组和转染序列2组24 h 穿过微孔膜的细胞数分别为（56．00±2．61）和（58．80±3．19）个，均少于阴性对照组的（76．60±5．08）个，差异均有统计学意义（t＝7．21、5．93，P 均＜0．05）。 QBC939细胞的细胞生存率、早期细胞凋亡比例和迁移能力与HuCCT1细胞相似。下调胆管癌细胞中 SIRT1的表达后，可显著下调生存素、神经型钙黏蛋白和波形蛋白的表达，上调 Bax 、剪切型 PARP 和上皮型钙黏蛋白的表达。结论 SIRT1在胆管癌细胞中高表达，下调胆管癌细胞中 SIRT1的表达可抑制细胞的增殖和迁移，促进其凋亡，机制可能与下调生存素，上调 Bax 蛋白的表达，抑制上皮间质转化的发生有关。

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序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨燕	徐州市中心医院消化科	5	27	3.0	5.0