靶向 survivin 基因的 shRNA 慢病毒载体的构建及其对膀胱癌 EJ 细胞凋亡的影响

• 作者: 付生军 卢建中 洪梅 王志平 陶燕 马宝良
• 来源期刊: 暨南大学学报（自然科学与医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 载体构建 survivin 短发卡状 RNA(shRNA) 膀胱癌 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 医学
• 页码范围: 239-245
• 页数: 7页
• 分类号: R737.14
• 字数: 4017字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11778/j.jdxb.2015.03.009

摘要

目的：构建 survivin 基因特异性 shRNA 慢病毒干扰载体，转染膀胱癌 EJ 细胞，研究 survivin 基因在膀胱癌细胞株中的表达抑制情况，观察 survivin shRNA 慢病毒载体对 EJ 细胞凋亡的影响．方法：以 survivin 基因为靶标设计 shRNA 干扰序列，克隆至 pSIH1-H1-copGFP 慢病毒载体．干扰载体鉴定正确后转染膀胱癌细胞株 EJ 细胞，荧光显微镜下观察 GFP 表达情况，实时荧光定量 PCR 检测 survivin 基因 mRNA 含量变化，Western blotting 法检测 sur-vivin 蛋白表达，Annexin V-FITC ／PI 双染法检测 EJ 细胞凋亡情况．结果：PCR 扩增鉴定、DNA 测序证实 survivin 慢病毒干扰载体构建成功；EJ 细胞经干扰载体处理后，EJ 细胞 survivin 基因 mRNA 水平下调了73.33％，蛋白表达受到显著抑制，EJ 细胞凋亡率达到24.39％．结论：成功构建了靶向 survivin 基因的 shRNA 重组慢病毒干扰载体，可以显著降低转染细胞 survivin 基因的表达水平，并有效提高膀胱癌细胞凋亡率．