罗尼氏弧菌Vibrio shilonii BY新琼胶酶基因的克隆、序列分析及表达

• 作者: 叶秀云 李仁宽 李婧玒 杨光 林娟 韩尧跃
• 来源期刊: 微生物学通报
• 关键词: 琼胶酶 罗尼氏弧菌 染色体步移技术 表达
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 基因克隆及功能研究
• 页码范围: 2133-2142
• 语种: 中文
• DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150022

摘要

[目的]从海洋来源的罗尼氏弧菌菌株BY中克隆得到一个具有琼胶酶活性的新基因,并对其进行重组表达.[方法]对实验室保藏的产琼胶酶菌株BY进行16S rRNA基因序列分析,并构建系统发育树.根据已报道的琼胶酶基因序列的同源性,设计简并引物,利用降落PCR(Touch-down PCR)及染色体步移技术扩增琼胶酶基因序列全长,对基因序列进行生物信息学分析.将目的基因插入pET22a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),对重组酶进行表达,利用DNS法测定了重组酶的酶活,对该重组琼胶酶酶学性质进行研究.[结果]克隆得到一条新的琼胶酶基因,命名为Vibrio sp.BY (GenBank登录号:AIW39921.1),Vibrio sp.BY基因序列全长2232 bp,编码744个氨基酸,理论分子量为85 kD,Vibrio sp.BY的氨基酸序列基因库中与已知的琼胶酶氨基酸序列Vibrio sp.EJY3的相似度为86％.发酵液琼胶酶酶活力为71.73 U/mL,证明表达的蛋白为琼胶酶.酶学性质研究表明重组琼胶酶的最适温度及pH分别为50℃和7.0,并且具有较好的稳定性.[结论]利用染色体步移技术克隆得到一条新的琼胶酶基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中实现了重组表达,为琼胶酶的应用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林娟	福州大学生物科学与工程学院	110	610	12.0	18.0
3	叶秀云	福州大学生物科学与工程学院	92	537	11.0	17.0
5	李仁宽	福州大学生物科学与工程学院	21	41	4.0	5.0
6	韩尧跃	福州大学生物科学与工程学院	3	8	2.0	2.0
7	杨光	福州大学生物科学与工程学院	9	55	4.0	7.0
8	李婧玒	福州大学生物科学与工程学院	2	3	1.0	1.0