H1亚型猪流感病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及其在浙江省的应用

• 作者: 周继勇 廖敏 曾嘉梅 颜焰
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流感病毒 血凝素抗原 杆状病毒 间接ELISA 抗体检测
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1101-1107
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2015.11.001

摘要

利用RT-PCR扩增了猪流感病毒分离株A/ Swine/Zhejiang/103 /2002(H1N1) HA1基因,并将其克隆至pFastBacHTA杆状病毒转移载体.将筛选的阳性重组转移载体pFastBacHTA-HA1转化至含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态细胞,构建重组转座子rBacmid-HA1.之后转染Sf9昆虫细胞制备rBV-HA1重组杆状病毒.SDS-PAGE分析显示,重组表达的HA1蛋白的分子质量约为45 ku.Western-blot结果显示,该HA1蛋白能与H1亚型猪流感阳性血清特异性结合,具有良好的抗原活性.利用镍柱纯化后的HA1蛋白作为包被抗原,建立了H1亚型猪流感病毒抗体间接ELISA检测方法,通过对各种条件进行优化,确定了最佳反应体系.该方法与多种猪病毒阳性血清无交叉反应性,与HI方法的符合率为92.4％,与IDEXX进口试剂盒的符合率为94.6％.用该方法对2014年从浙江省规模化猪场采集的猪血清进行检测,阳性率为17.4％(589/3 379).该方法的建立为浙江省猪流感的监测及防控提供了重要检测工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周继勇		86	753	16.0	23.0
2	廖敏		38	913	15.0	30.0
3	曾嘉梅		3	11	1.0	3.0
4	颜焰		12	25	2.0	4.0