牛杀菌/通透性增加蛋白对脂多糖介导的炎性细胞因子表达的影响

• 作者: 吴卫东 姚楠 张宁 张雪梅 李文蓉 白杰
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 杀菌/通透性增加蛋白 脂多糖 免疫应答 炎性细胞因子
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 动物及兽医生物技术
• 页码范围: 195-205
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.140207

摘要

杀菌/通透性增加蛋白(Bactericidal/permeability-increasing protein,BPI)能结合并特异地中和来自革兰氏阴性菌外膜的脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS).为了研究牛源BPI蛋白及其N端结构域在LPS介导的免疫应答中的作用,本文将BPI全长1 449 bp编码区序列(BPI)和其N端714 bp的编码区序列(BPI714)分别导入mHEK293细胞,分析了稳定表达的BPI或BPI714对LPS介导的炎性细胞因子表达的影响.首先将构建的pLEX-BPI/pLEX-BPI714载体分别转染mHEK293细胞,获得稳定表达牛源BPI或BPI714的mHEK293细胞:然后用LPS刺激上述细胞,分别收集刺激前、刺激后1h、3h、6h、12h、24 h、36h和48 h的细胞,并同时收集未表达BPI或BPI714的mHEK293细胞在各时间点的样品作为对照;采用定量RT-PCR检测上述细胞中炎性细胞因子IL-8、IL-1β、TNF-α、NF-κB-1、NF-κB-2的相对表达水平,比较LPS刺激前后表达BPI/BPI714和对照细胞中上述基因转录水平的变化规律.研究表明,LPS刺激后,对照细胞中IL-8、IL-Iβ、TNF-α、NF-κB-2表达水平在不同时间点均显著提高(P＜0.05),并呈现规律性变化;而稳定表达BPI/BPI714的细胞在同样刺激条件下,IL-8、IL-1β、TNF-α、NF-κB-2基因的转录水平均未发生显著变化(P＞0.05).根据我们的实验结果,在mHKE293细胞模型中BPI或BPI714均能显著降低LPS介导的炎性细胞因子表达,抑制LPS介导的免疫应答.这不仅为进一步研究BPI抑菌机制和利用其抑菌功能提供了可靠的实验依据,也为分析抗菌蛋白的抗菌效果提供了一种可靠的实验方法.