H3N2亚型猪流感病毒重庆株的分离、鉴定、基因组测定及序列分析

• 作者: 付利芝 张素辉 张邑帆 杨柳 杨睿 翟少钦 郑华
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流感病毒 H3NA亚型 HA基因 NA基因 序列分析
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 359-366
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文

摘要

从猪流感疑似病例中分离鉴定猪流感病毒,并对病毒进行全基因组测序及其序列的分析.采用鼻棉拭子法从猪流感疑似病猪的鼻中收集病样,制成病毒悬液,经SPF鸡胚增殖培养和纯化.采用红细胞凝集、血凝抑制和神经氨酸酶抑制试验进行病毒亚型的判定,并作电镜观察.运用RT-PCR法扩增病毒的8个基因片段,分别克隆到pMD18-T载体,进行全基因组测序及序列分析.结果表明,获得1株猪流感病毒,经血凝、血凝抑制和神经氨酸酶抑制试验,判定为H3N2亚型,命名为A/ swine/Chongqing/CQ/3/2011 (H3N2),简称SIV CQ3.基因组序列比较分析显示,SIV CQ3 8个节段与不同时间的猪流感广东分离株(H3N2亚型)相应基因的核苷酸相似性最高,可能来源于H3N2亚型SIV.然而NP、HA和NA基因编码氨基酸序列与参考毒株A/New York/392/2004 (H3N2)的相似性比较低,分别达95％、89％和90％;而血凝素(HA)裂解位点处的氨基酸序列为P E-K-Q-T-R↓G,与参考毒株的一致,不具有高致病分子特征.此外,HA和NA的糖基化位点、受体结合位点处氨基酸存在一定程度的差异.最后,系统进化树分析显示NP、HA基因位于SIV群,与A/swine/Guangdong/2006/(H3N2)处于同一分支;而NA基因与禽流感(A/duck/Ontario/2000/ AJ697881)和猪流感位于同一个进化单元,表明这株H3N2亚型流感病毒在不断的发生演变.