GST-hZimp10融合蛋白的重组及抗体制备

• 作者: 宋润敏 李江 杨柳 汪小菀 王冰瑜
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: hZimp10 谷胱甘肽硫转移酶融合蛋白 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 方法学
• 页码范围: 656-661
• 页数: 6页
• 分类号: Q78|R392
• 字数: 3737字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20150342

摘要

目的:构建pGEX-4T-1/ hZimp10重组质粒,并在大肠杆菌中表达,纯化出GST-hZimp10融合蛋白,用以制备抗hZimp10抗体.方法:采用PCR技术以pcCDNA3.1-Flag-hZimp10为模板,扩增出hZimp10蛋白N端128个氨基酸对应DNA片段,并将其与谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达质粒pGEX-4T-1进行重组,酶切鉴定后获得重组质粒,并转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达,获得GST-hZimp10融合蛋白,纯化后将其作为抗原免疫家兔制备多克隆抗体,用间接ELISA法检测抗体效价,Western blotting法检测抗体特异性.结果:经BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切鉴定,确定PGEX-4T-1/hZimp10重组质粒中包含384 bp的片段,与测序结果一致,表明pGEX-4T-1/hZimp10重组质粒构建成功.SDS-PAGE电泳,融合蛋白成功表达,蛋白相对分子质量大小与预期相符.间接ELISA法检测抗hZimp10抗体效价可达1∶100 000以上.Western blotting法,hZimp10在LNCaP细胞中具有很高的特异性.结论:成功获得GST-hZimp10融合蛋白,且制备了抗hZimp10抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李江	吉林大学口腔医院口腔修复科	84	717	14.0	21.0
2	杨柳	吉林大学口腔医院口腔修复科	54	72	4.0	6.0
3	汪小菀	东北师范大学生命科学学院肿瘤信号转导实验室	1	2	1.0	1.0
4	王冰瑜	东北师范大学生命科学学院肿瘤信号转导实验室	1	2	1.0	1.0
5	宋润敏	东北师范大学生命科学学院肿瘤信号转导实验室	2	3	1.0	1.0