Flanders 病毒 TaqMan RT-PCR 检测方法的建立

• 作者: 付士红 何英 刘岩 曹玉玺 李浩 王环宇 聂凯 赫晓霞 高晓艳
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: Flanders病毒 TaqMan RT-PCR 分子检测
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 论 著
• 页码范围: 212-215
• 页数: 4页
• 分类号: R373.9
• 字数: 2871字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2015.03.005

摘要

目的：应用TaqMan PCR技术建立针对Flanders病毒（Flanders virus ，FLAV）的实时荧光定量PCR检测方法。方法下载GenBank中FLAV基因序列资料并进行多序列比对分析，选择其L基因中的高保守序列片段进行FLAV特异引物与探针的设计，使用来自于不同科属的15株病毒验证方法特异性，通过重复／平行实验验证方法稳定性，并利用体外转录的L基因RNA标准品建立基因拷贝数绝对定量分析模型。结果引物与探针工作特异性良好，同一样品重复检测Ct值的变异系数均小于1．7％，定量分析模型灵敏度达到100 copies／PCR。结论建立完成针对FLAV的TaqMan PCR检测方法。实验结果显示，本方法具有高特异性、高敏感性、高稳定性、简便、易操作的特点，为今后对 FL A V的检测、监测及相关研究提供技术手段。