减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcyaΔasdC78-1（pYA3493）宿主-载体平衡致死系统的构建及其生物学特性研究

• 作者: 尚珂 张俊峰 张春杰 李银聚 程相朝 翟崇凯 赵战勤 陈桂华 颜云飞
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 自杀性质粒 宿主-载体平衡致死系统 ΔcrpΔcyaΔasdC78-1(PYA3493) 口服活疫苗载体
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 358-363
• 页数: 6页
• 分类号: S852.61
• 字数: 5198字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2015.03.015

摘要

目的：开发应用于猪的稳定携带异源基因的口服活疫苗载体。方法：本研究在减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcyaC78-1的基础上，运用自杀性质粒pREasd介导的细菌同源重组技术，构建缺失株ΔcrpΔcyaΔasdC78-1，再将携带asd基因的互补质粒pYA3493电转至上述菌株，构建ΔcrpΔcyaΔasdC78-1（pYA3493）宿主-载体平衡致死系统，并进一步研究其生物学特性。结果：PCR 及测序结果共同表明ΔcrpΔcyaΔasdC78-1（ pYA3493）构建成功。生物学特性检测结果表明ΔcrpΔcyaΔasdC78-1（pYA3493）的血清型与亲本株ΔcrpΔcyaC78-1和疫苗株C500相同，并能够稳定遗传缺失型asd基因片段；其生长速度略慢于ΔcrpΔcyaC78-1，且二者均明显慢于疫苗株C500；其生化特性结果也与ΔcrpΔcyaC78-1基本相同。小鼠口服攻毒试验表明ΔcrpΔcyaΔasdC78-1（pYA3493）的毒力与ΔcrpΔcyaC78-1基本相当，但其半数致死量约为疫苗株C500的412倍。结论：上述结果表明，减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcyaΔasdC78-1（ pYA3493）有潜力作为高效表达外源基因的口服活疫苗载体。