减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔsseK1Δasd宿主-载体平衡致死系统的构建及其生物学特性研究

• 作者: 丁轲 何雷 张春杰 杨亚东 程相朝 贾艳艳
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 鼠伤寒沙门菌 自杀性质粒 宿主-载体平衡致死系统 活疫苗载体
• 年，卷（期）: 2017,（10）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 1520-1525
• 页数: 6页
• 分类号: S852.612
• 字数: 5489字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2017.10.016

摘要

目的:为构建减毒鼠伤寒沙门菌分泌性蛋白K1缺失株平衡致死系统,并将其开发为能够稳定携带外源基因的活疫苗载体.方法:利用重组自杀性质粒(pREΔasd)介导的等位基因交换技术,以减毒鼠伤寒沙门菌株SL1344ΔsseK1为亲本株,运用二步法筛选asd基因缺失株SL1344ΔsseK1Δasd.将携带有asd基因的无抗性pYA3493质粒电转至上述缺失菌株SL1344ΔsseK1Δasd,构建SL1344ΔsseK1Δasd(pYA3493)重组菌株.结果:PCR及测序结果表明SL1344ΔsseK1Δasd(pYA3493)构建成功.进一步研究表明重组菌株SL1344ΔsseK1Δasd(pYA3493)血清型和强毒株SL1344及亲本株SL1344ΔsseK1相同,且能稳定遗传缺失后的asd基因;其生化特性和生长速度与强毒株SL1344及亲本株SL1344ΔsseK1相比均无明显差异.小鼠毒力试验表明,SL1344ΔsseK1Δasd(pYA3493)口服感染6周龄BALB/c小鼠的LD50为5.24×108 CFU,毒力较强毒株SL1344约下降至0.048%;免疫保护效力试验显示,运用鼠伤寒沙门菌野生毒株对免疫后第17天的小鼠攻毒有62.5%的保护率,与亲本株SL1344ΔsseK1基本一致.结论:以上结果表明,鼠伤寒沙门菌分泌性蛋白K1缺失株宿主-载体平衡致死系统构建成功,且遗传稳定,毒力明显降低,具有较好的免疫原性,为深入研究以鼠伤寒沙门菌为载体的口服多价疫苗奠定基础.