MicroRNA let-7e对LPS诱导的TNF-α表达的影响及机制的初步研究

• 作者: 张倩倩 张英可 桂连 黄俊琪
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: 原代单核细胞 let-7e TNF-α LPS
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 884-889
• 页数: 6页
• 字数: 4557字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2015.12.005

摘要

目的 研究let-7e对LPS诱导的人原代单核细胞产生的TNF-α表达的影响及其机制.方法 用全血分离人原代单核细胞,流式细胞术检测单核细胞表面标记CD14;let-7e mimics或mimicsNC瞬转原代单核细胞24 h、36 h、48 h,qRT-PCR和免疫荧光法检测其转染效率;采用1 mg/L LPS刺激原代单核细胞1h、3h、6h、12 h后,ELISA法检测细胞培养上清中TNF-α的浓度,筛选出LPS最佳刺激时间;qRT-PCR法及ELISA法评估let-7e对LPS诱导原代单核细胞产生TNF-α的影响;Western blot法检测瞬转let-7e mimics后EZH2的表达水平以及瞬转siEZH2后NF-κB p65、ARFGAP1和Arfap-tin2的表达水平.结果 CD14+细胞大于70％;免疫荧光结果显示miRNA模拟物可以转染原代单核细胞,转染率约为70％;let-7e mimics转染原代单核细胞24 h,细胞内即可表达较高水平的let-7e;LPS刺激原代单核细胞12h即可产生较高水平的TNF-α.ELISA结果证实let-7e mimics显著抑制LPS诱导的TNF-α的产生,同时在mRNA水平也得到一致的结果;Western blot结果显示let-7e mimics组EZH2的水平明显低于let-7e mimics NC组,沉默EZH2后胞核中NF-κB p65显著下调,沉默EZH2后囊泡转运调节蛋白ARFGAP1和Arfaptin2的表达显著下降.结论 在原代单核细胞中,let-7e显著抑制LPS诱导的TNF-α的表达;其机制可能是let-7e靶向作用EZH2进而调节NF-κB的活性及囊泡转运相关蛋白ARFGAP1和Arfaptin2的表达水平.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄俊琪	中山大学中山医学院免疫学研究所	21	76	5.0	8.0
2	张英可	中山大学中山医学院免疫学研究所	3	4	2.0	2.0
3	桂连	中山大学附属第一医院广东省器官捐献与移植免疫重点实验室	3	2	1.0	1.0
4	张倩倩	中山大学附属第一医院广东省器官捐献与移植免疫重点实验室	1	2	1.0	1.0