扇棘单睾吸虫 Real-time PCR 与常规 PCR 检测方法的建立

• 作者: 唐智芳 宋青 张强 李树清 林颖峥 梅雪芳 王巧全 石云良 陈志飞 黄维义 黄腾飞
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 扇棘单睾吸虫 实时荧光定量 PCR 常规 PCR 鉴定
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 62-67
• 页数: 6页
• 分类号: S851.71
• 字数: 4372字
• 语种: 中文

摘要

根据扇棘单睾吸虫核糖体 DNA 第一内转录间隔区（ITS1）序列，应用 Primer premier 5．0软件自行设计一对可同时应用于 real-time PCR 和常规 PCR 的特异引物，建立 real-time PCR 与常规 PCR 鉴定扇棘单睾吸虫的方法，评估其特异性及灵敏性。应用建立的方法鉴定犬猫内脏中收集的吸虫，并用测序进行验证，检验方法的准确性和实用性。结果表明，建立的两种方法均只能特异性扩增扇棘单睾吸虫目的片段，不与横川后殖吸虫、钩棘单睾吸虫、华支睾吸虫、瓦氏瓦特松吸虫、棘口属吸虫、背孔属吸虫、心形咽口吸虫、野牛平腹盘吸虫、东方次睾吸虫、卫氏并殖吸虫、异尖属线虫、宫脂属线虫发生交叉扩增；敏感性试验表明， real-time PCR 和常规 PCR 检测扇棘单睾吸虫质粒的最低检测限分别为43拷贝和86拷贝。建立的 real-time PCR 标准曲线的循环阈值（Ct）与模板拷贝数呈良好的线性关系（R2＝0．998）。鉴定来自犬猫的吸虫17条，结果显示两种方法均能准确鉴定出扇棘单睾吸虫。