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MG-132提高TNFR-Fc融合蛋白在CHO细胞中表达的研究
MG-132提高TNFR-Fc融合蛋白在CHO细胞中表达的研究
作者:
梁翰章
温家明
熊盛
聂艳峰
裴运林
谢秋玲
雷云
黄雯茜
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
MG-132
TNFR-Fc降解
CHO细胞
泛素化
提高表达
摘要:
目的:在不影响细胞活力的前提下,通过抑制人肿瘤坏死因子受体-Fc(TNFR-Fc)融合蛋白的降解,提高其在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的产量和质量.方法:通过在细胞培养过程中加入全蛋白质合成抑制剂Cycloheximide、溶酶体抑制剂Leupeptin、蛋白酶体抑制剂MG-132,验证TNFR-Fc融合蛋白在CHO细胞的降解途径;免疫印迹(Western blot)方法检测在细胞内TNFR-Fc融合蛋白的变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测分泌表达的TNFR-Fc融合蛋白的含量.Protein A亲和层析纯化细胞培养液上清,高效液相色谱(HPLC)检测重组蛋白的纯度,并通过阻断肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导的L929细胞毒作用来检测纯化的TNFR-Fc蛋白的活性.结果:TNFR-Fc在CHO细胞内,经泛素蛋白酶体途径降解,稳定表达TNFR-Fc的CHO细胞培养过程中添加50μmol/L MG-132,可以使TNFR-Fc融合蛋白的分泌表达量提高42.35%,纯化后,二聚体比例提高28.60%,并且纯化后目的蛋白的比活性也增加.结论:在不影响细胞活力、蛋白质生物学活性的前提下,添加蛋白酶体抑制剂MG-132提高TNFR-Fc融合蛋白在CHO细胞中的表达量,为进一步研究从抑制蛋白质降解途径来提高重组蛋白在CHO细胞中的表达量提供了现实依据.
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文献信息
篇名
MG-132提高TNFR-Fc融合蛋白在CHO细胞中表达的研究
来源期刊
中国生物工程杂志
学科
生物学
关键词
MG-132
TNFR-Fc降解
CHO细胞
泛素化
提高表达
年,卷(期)
2015,(9)
所属期刊栏目
研究报告
研究方向
页码范围
1-6
页数
分类号
Q816
字数
语种
中文
DOI
10.13523/j.cb.20150901
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TNFR-Fc降解
CHO细胞
泛素化
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研究去脉
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期刊影响力
中国生物工程杂志
主办单位:
中国科学院文献情报中心
中国生物技术发展中心
中国生物工程学会
出版周期:
月刊
ISSN:
1671-8135
CN:
11-4816/Q
开本:
大16开
出版地:
北京中关村北四环西路33号
邮发代号:
82-13
创刊时间:
1976
语种:
chi
出版文献量(篇)
4896
总下载数(次)
30
总被引数(次)
45351
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