异子蓬PEPC基因原核表达及其重组菌在非生物胁迫下的耐受力解析

• 作者: 兰海燕 程刚
• 来源期刊: 西北植物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 异子蓬 C4盐生植物 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 非生物胁迫
• 年，卷（期）: 2015,（9）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1767-1775
• 页数: 9页
• 分类号: Q786|Q789
• 字数: 6018字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7606/j.issn.1000-4025.2015.09.1767

摘要

该研究在Escherichia coli Transetta(DE3)中表达了C4盐生植物异子蓬的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因(PEPC),并进行了酶学特性及非生物胁迫响应分析,以期初步阐明PEPC基因在非生物胁迫下的生物学功能,为异子蓬PEPC的非生物胁迫的抗性生理研究提供参考依据.基于5'-RACE技术获得异子蓬PEPC全长基因(GenBank登录号为KP985714),构建了E.coli Transetta::pGEX-4T-1-PEPC重组菌株.通过分光光度法和酶联免疫吸附技术(ELISA)分别测定了PEPC重组蛋白的酶活和含量,并检测E.coli Transetta::pGEX-4T-1-PEPC重组菌株在非生物胁迫下的耐受性.生物信息学分析发现,该PEPC基因的cDNA全长为2 901 bp,编码966个氨基酸,与甜菜(Beta vulgaris)PEPC的氨基酸序列一致性达90％,具有PEPC的典型保守结构域(PEPcase)以及V1TAHPTQsiRR和VMIGYSDSgKDAG活性位点;PEPC蛋白属PEPC-1型的不含信号肽的非分泌型亲水蛋白.Western blot结果显示,融合GST的PEPC蛋白的分子量约130～ 140 kD;在37℃用0.8 mmol/L IPTG诱导E.coli Transetta::pGEX4T-1-PEPC重组菌株显示出更高的PEPC酶活及含量,而且E.coli Transetta::pGEX4T1PEPC重组菌在200～800 mmol/L NaCl、5％～20％聚乙二醇(PEG)6 000、25℃～52℃温度范围、50～400μmol/L甲基紫精和pH 3.0～11.0的非生物胁迫下生长均明显优于对照.研究表明,异子蓬PEPC基因的表达提高了E.coli耐受非生物胁迫的能力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	兰海燕	新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室	43	237	10.0	14.0
2	程刚	新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室	3	8	2.0	2.0