杨树胞外蛋白的提取分离及2-D电泳体系的建立

• 作者: 乐利 杨华 林芳芝 汪南阳 王俊霖 罗永亚 陈颖
• 来源期刊: 西北植物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 胞外蛋白 NL895杨 提取方法 双向电泳分析
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 研究技术与方法
• 页码范围: 199-206
• 页数: 8页
• 分类号: Q503
• 字数: 7749字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7606/j.issn.1000-4025.2015.01.0199

摘要

该研究以美洲黑杨杂种优良无性系NL895杨(Populus deltoides×Populus euramericana cv,)组培苗叶片和茎段为研究对象,对NL895杨叶片细胞壁蛋白(cell wall proteins,CWPs)和茎段质外体蛋白(apoplastic proteins,APPs)的提取、分离和双向电泳等技术进行了系统研究.结果表明:10 g以上叶片、超声波破碎10 min、CaCl2法提取的细胞壁蛋白效果较好,经G-6-PDH酶活性检测,提取的细胞壁蛋白胞质污染率较低;真空渗透法提取的茎段质外体蛋白胞质污染率较前者高,但在允许范围之内.TCA/丙酮沉淀法纯化提取的细胞壁蛋白、pH 4～7的24cm胶条、上样量为500 μg的双向电泳体系,其蛋白电泳图谱中的斑点多而清晰,斑点数达550多个,是叶片细胞壁蛋白电泳分析较适合的体系;pH 3～10胶条对茎段质外体蛋白的电泳分离效果较好.该研究初步建立了杨树胞外蛋白的提取、分离及2-DE电泳体系,为木本植物胞外蛋白的研究奠定了基础.