昆虫细胞制备AAV-ITR基因表达微载体

• 作者: 张春 李泰明 潘俊杰 祁静
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 基因治疗 基因表达微载体 杆状病毒表达系统 非病毒载体
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 生物技术与方法
• 页码范围: 1230-1238
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.140485

摘要

AAV-ITR基因表达微载体是只含有腺相关病毒(Adeno-associated virus,AAV)倒置末端重复序列(Inverted terminal repeats,ITR)、基因表达顺式元件和目的基因,而不合有其他外源DNA序列的双链或单链DNA.本研究利用杆状病毒表达系统,制备得到两种重组杆状病毒Bac-ITR-EGFP和Bac-inrep,并将二者的P3代病毒共同感染昆虫细胞Spodoptera frugiperda (Sf9),抽提小分子量DNA,获得AAV-ITR-EGFP基因表达微载体,2×107的Sf9细胞抽提可以得到100 μg AAV-ITR-EGFP基因表达微载体,核酸电泳显示AAV-ITR-EGFP基因表达微载体主要以单体和二聚体的形式存在.将AAV-ITR-EGFP基因表达微载体通过polyethylenimine (PEI)转染HEK 293T细胞,24 h后荧光显微镜观察有EGFP表达,48 h后达到高峰,转化效率达到65％.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李泰明	中国药科大学生命科学与技术学院	33	110	6.0	8.0
2	张春	中国科学院苏州生物医学工程技术研究所苏州市分子诊断和治疗技术重点实验室	13	156	5.0	12.0
3	祁静	中国科学院苏州生物医学工程技术研究所苏州市分子诊断和治疗技术重点实验室	3	8	1.0	2.0
4	潘俊杰	中国药科大学生命科学与技术学院	1	1	1.0	1.0