小鼠生精细胞特异表达 载体AAV-Dazl-RFP-Flag的构建及表达验证

• 作者: 宋伟 李凯 李梦真 李雅惠 杨涛 罗艳云 邙新雨
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: Dazl 启动子 基因治疗 精子发生
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 753-758
• 页数: 6页
• 分类号: R334
• 字数: 3218字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建含有生精细胞特异启动子Dazl的真核报告基因表达载体AAV-Dazl-RFP-Flag,研究生精细胞特异启动子Dazl在生精细胞中的启动效果.方法 通过同源重组的方法 对腺相关病毒载体AAV-CMV-RFP-Flag进行改造,构建小鼠生精细胞特异表达载体AAV-Dazl-RFP-Flag.在体外,转染GC1-spg野生型细胞和HEK-293T细胞,通过免疫荧光、q-PCR、Western blot验证AAV-Dazl-RFP-Flag在体外的表达特异性.在体内,将AAV-Dazl-RFP-Flag进行腺相关病毒(AAV)包装,通过显微注射技术将AAV注射到小鼠睾丸内,通过q-PCR检测AAV-Dazl-RFP-Flag在体内的表达特异性.结果 成功构建了AAV-Dazl-RFP-Flag表达载体,并在体内、外水平验证了AAV-Dazl-RFP-Flag的表达.结论 小鼠生精细胞特异表达载体AAV-Dazl-RFP-Flag可以在生精细胞中特异性表达,为雄性生殖不育的基因治疗提供更高效的载体工具.