重组鸡IFN-α-IL-18融合基因的酵母分泌表达及其抗IBDV活性研究

• 作者: 何雷 刘一尘 李银聚 杨丹芳 杨惠 程相朝 金修哲 韩海峰 颜云飞
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: IFN-α基因 IL-18基因 融合蛋白 酵母表达 淋巴细胞转化试验 IBDV
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1759-1764
• 分类号: S852.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2015.11.06

摘要

为探讨鸡IFN-α和IL-18及其融合蛋白抗IBDV活性,本研究将鸡IFN-α、IL-18及其融合基因分别置于酵母表达载体pPICZ-αA的AOX1启动子下游,构建重组质粒pPICZ-IFN-α、pPICZ-IL-18和pPICZ-IFN-α-IL-18.将重组质粒分别用PmeⅠ酶切线性化,电穿孔方法导入酵母Pichia Pastoris X-33感受态细胞,以1％甲醇诱导表达,SDS-PAGE和Western blot检测表达蛋白,淋巴细胞转化试验初步检测表达产物生物学活性,鸡胚接种试验对表达产物的抗IBDV效果进行评价.结果表明,在酵母培养上清液中存在相对分子质量分别为22 000、23 000和43 000的目的蛋白,表达的IL 18和IFN-α-IL-18对鸡淋巴细胞具有明显的诱导转化作用(P＜0.05).IFN-α-IL-18融合蛋白能够显著抑制IBDV在鸡胚中的增殖(P＜0.01),IFN-α和IL-18酵母表达产物对IBDV也有明显的抑制作用(P＜0.05).这为进一步开展IFN-α-IL-18融合蛋白的功能研究及其在鸡病毒性疫病防控中作用的探索奠定了基础.