构建携带人/鼠IFN-γ重组腺病毒体外转染人脐带间充质干细胞的实验研究

• 作者: 李慧 胡琼英 贾永前
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 关键词: γ-干扰素 脐带间充质干细胞 腺病毒载体 转染
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 805-810
• 语种: 中文

摘要

目的 构建人/鼠干扰素(IFN-γ)的重组腺病毒,体外转染人脐带间充质干细胞(human umbilical mesenchymal stem cells,HUMSCs),为研究IFN-γ在预防和治疗移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD)中的作用提供实验依据.方法 采用PCR法从含有人/鼠IFN-γ基因的质粒中扩增出目的基因片段IFN-γ,然后定向克隆到穿梭质粒载体pDC316中,构建pDC316-IFN-y,经酶切、PCR及测序鉴定后,再将IFN-γ定向克隆至腺病毒骨架载体,从而构建携带IFN-γ的重组腺病毒载体,并转染人胚肾细胞系293细胞,进行重组腺病毒(Ad-IFN-γ)的包装、生产和纯化;用半数组织培养感染量(50％ tissue culture infective dose,TCID50)法检测重组腺病毒滴度.将Ad-IFN-γ及空病毒(Ad-null,作为载体阴性对照)分别转染HUMSCs,在荧光显微镜下观察细胞绿色荧光蛋白(GFP)的表达,采用Western blot与ELISA法鉴定IFN-γ蛋白的表达.结果 成功构建了携带IFN-γ的重组腺病毒,鼠IFN-γ(Ad-mIFN-γ)的滴度为1.0×1010 IU/mL,人IFN-γ(Ad-hIFN-γ)的滴度为1.6×1010IU/mL,Ad-GFP的滴度为1.0×109 IU/mL.Ad-IFN-γ转染HUMSCs后24 h开始观察到绿色荧光,72 h时该荧光表达更强;Western blot和ELISA法均证实HUMSCs表达IFN-γ蛋白.结论 成功构建了携带人/鼠IFN-γ基因的重组腺病毒载体,并证实其可有效转染HUMSCs.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	贾永前	四川大学华西医院血液科	86	374	9.0	15.0
2	胡琼英	四川大学华西医院血液科	1	1	1.0	1.0