载体介导的RNA干扰技术抑制肝癌细胞中糖原合成酶激酶3β表达的研究

• 作者: 刘璐 宋丹青 张娜 李电东 王真 窦玥莹 邓洪斌
• 来源期刊: 中国医药生物技术
• 关键词: 糖原合成酶激酶3β RNA干扰 癌,肝细胞 siRNA表达载体
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 131-138
• 页数: 8页
• 字数: 5913字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2015.02.007

摘要

目的构建和筛选能高效、特异性抑制人 GSK-3β基因表达的 siRNA 表达载体，探讨其对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。 <br>　　方法提取人 L02细胞总 RNA，RT-PCR 扩增 GSK-3β基因序列，克隆至 pSEB-HUS 真核表达载体，构建 pSEB-G重组质粒。将设计、合成的3条靶向 GSK-3β基因编码区的 siRNA 及阴性对照分别克隆至 pSEB-G，构建 siRNA 表达载体 pSEB-si1-G、pSEB-si2-G、pSEB-si3-G 及 pSEB-siN-G。将 siRNA 表达载体瞬时转染 HepG2细胞，通过绿色荧光信号、RT-PCR 和 Western blot 观察和检测其对 GSK-3β基因的抑制效果，MTT 实验和 caspase-3活性分析检测其对 HepG2细胞增殖和凋亡的影响。 <br>　　结果经双酶切及测序证实，所构建 siRNA 表达载体目的基因大小、序列与预期相符。瞬时转染 HepG2细胞后，其中的 pSEB-si1-G 能使细胞中绿色荧光信号明显减少，可显著抑制 GSK-3βmRNA 的表达及蛋白的合成，并使 HepG2细胞增殖明显降低，caspase-3活性显著升高。 <br>　　结论成功构建了靶向 GSK-3β基因的 siRNA 表达载体，沉默 GSK-3β能显著抑制 HepG2细胞的生长并诱导其发生凋亡。