华南象草PpCAD基因的亚细胞定位及其在转基因烟草中的异源表达

• 作者: 唐然 张博雅 张向前 彭小群 江院 解新明
• 来源期刊: 西北植物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 华南象草 木质素 PpCAD 亚细胞定位 遗传转化 烟草
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1069-1077
• 页数: 9页
• 分类号: Q785|Q789
• 字数: 7509字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7606/j.issn.1000-4025.2015.06.1069

摘要

该研究根据已克隆的华南象草(Pennisetum purpureum cv.Huanan)肉桂醇脱氢酶(CAD)基因PpCAD的cDNA序列,构建亚细胞定位载体pAN580-PpCAD,用PEG介导法转化象草原生质体,以探究PpCAD蛋白在细胞内的定位;同时构建植物过表达载体pBA002-PpCAD,通过农杆菌介导法在烟草中异源表达,以研究PpCAD基因与植物木质素合成的关系.结果显示:(1) PpCAD定位在象草原生质体的细胞质内;(2)过表达载体pBA002PpCAD转化烟草后获得27株转基因烟草,其中25株PCR鉴定为阳性;(3)半定量RT-PCR检测6株转基因烟草后发现,PpCAD基因在不同植株的表达量存在差异,通过Southern杂交检测后发现该差异与目的基因插入的拷贝数有关;(4)6株转基因烟草和野生型烟草表型上没有明显差异,除目的基因多拷贝插入的植株OEC6外,木质素含量有不同程度的提高,最高比野生型提高了56.50％.研究表明,PpCAD是一个细胞质蛋白,在烟草中过表达PpCAD能够提高植株木质素含量,表明PpCAD基因参与了植物的木质素合成,可用于象草的木质素调控研究.