可调控肝脏特异性表达HCV全基因转基因小鼠模型的建立

• 作者: 于虹 刘晨风 吴小红 周育森 姜玉庭 孙世惠 曾扬 王友亮 赵亚光 赵光宇 郭彦 高同同 高基民
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 丙型肝炎病毒 转基因小鼠 Dox诱导 药物评价
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 159-163
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3735字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2015.02.001

摘要

目的：构建一种可调控肝细胞特异性表达丙型肝炎病毒（HCV）全基因的小动物模型。方法：将9.6 kb的HCV全长基因JFH1插入Tet-on系统效应表达载体pTRE2中，并在HCV全基因3'端插入丁型肝炎病毒（HDV）核酶序列，从而构建转基因载体pTRE2-JFH1（HCV）；将该转基因载体线性化后显微注射获得整合有HCV全基因的TRE2-HCV首建鼠；将该阳性鼠与本室保存的Alb-rtTA转基因小鼠杂交，获得肝细胞白蛋白启动子调控HCV全基因表达的Tet-on-Alb-HCV双转基因小鼠；在强力霉素（Dox）诱导后通过PCR、Western印迹、免疫组化等方法鉴定转基因小鼠HCV基因整合及HCV蛋白在肝组织中的表达；实时定量PCR检测小鼠血清及肝组织中的HCV滴度；用HCV反义小分子药物anti-miR122评价该模型在药物评价中的应用。结果：获得了整合rtTA基因和HCV全长基因的双转基因小鼠；Dox诱导下，该转基因小鼠可在肝组织长期特异性表达HCV全长基因，小鼠血清中可检测到HCV的RNA；分子药物anti-miR122可降低血清中的HCV滴度。结论：构建了可调控肝组织特异性表达HCV全基因的转基因小鼠模型，该小鼠模型可应用于HCV药物筛选和评价研究。