甲型副伤寒沙门菌噬菌体 LSPA1启动子筛选方法的建立

• 作者: 井申荣 冯梦蝶 宋武战 曾韦锟 杨洪文 毛普加 洪愉 王纪爱 许泽仰 赵继华 黄芬
• 来源期刊: 郑州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 甲型副伤寒沙门菌 噬菌体 启动子
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 745-748,749
• 页数: 5页
• 分类号: Q939.48|R378.2
• 字数: 3687字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13705/j.issn.1671-6825.2015.06.004

摘要

目的：通过构建pCAT3启动子陷阱载体筛选甲型副伤寒沙门菌噬菌体LSPA1启动子。方法：PCR无义突变去除pCAT2载体骨架上CalⅠ酶切位点，并在CAT片段的5’端引入CalⅠ的酶切位点，构建启动子陷阱载体pCAT3。 TaqⅠ酶切噬菌体LSPA1基因组，插入pCAT3载体中，转化至大肠杆菌DH5α，通过氯霉素抗性平板筛选获得噬菌体LSPA1基因文库菌；随机挑取1株提取质粒，测序及比对分析插入序列；根据分析结果设计引物，扩增可能的启动子序列，并插入验证载体p-3lysm-egfp，转化DH5α，荧光显微镜观察。结果：成功构建pCAT3启动子陷阱载体，获得约100启动子文库菌，其中1株文库菌质粒中随机插入片段可能对应噬菌体LSPA1的 ORF4启动子；插入待验证DNA片段的p-3lysm-egfp载体重组菌在荧光显微镜下能见到明显绿色荧光。结论：该启动子文库可有效筛选噬菌体LSPA1启动子，为进一步深入研究噬菌体LSPA1提供帮助。