鼠疫耶尔森菌Pla毒力蛋白的表达、纯化及其活性研究

• 作者: 冯娜 周亚洲 杨瑞馥 毕玉晶 汪琼 王效义 范艳晓 韩延平
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 鼠疫耶尔森菌 纤维蛋白酶原激活剂 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2015,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 677-681,687
• 页数: 6页
• 分类号: Q71
• 字数: 6075字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2015.09.007

摘要

目的：制备鼠疫耶尔森菌（Yersinia pestis）重组纤溶酶原激活剂（Pla）蛋白，为研究鼠疫菌蛋白之间相互作用和鼠疫的免疫学诊断奠定基础。方法应用PCR从鼠疫菌基因组中扩增pla基因，将其克隆到pET28a表达载体中；转化大肠杆菌BL21中，IPTG诱导表达；SDS-PAGE电泳检测表达结果；应用8 mol／L尿素将包涵体变性，梯度稀释透析法将其复性，SDS-PAGE电泳和Western印迹检测目的蛋白；奶粉平板法检测纤溶酶原激活剂活性。结果与结论琼脂糖凝胶电泳和测序结果证明表达质粒构建成功；SDS-PAGE电泳结果表明Pla蛋白以包涵体形式表达，表达产物主要为目的蛋白，且目的蛋白的表达量较高；包涵体经变性、复性得到了电泳纯Pla蛋白，并具有纤溶酶原激活剂活性。该研究提供了一种简单、快速、高效制备具有活性的Pla蛋白的方法。