牛UK株轮状病毒VP8*蛋白多拷贝嵌合表位的免疫原性分析

• 作者: 倪宏波 冉旭华 张峣 曹思 苗艳 闻晓波 魏晓曼
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 轮状病毒 VP8*蛋白 表位疫苗 原核表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2015,（9）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1429-1434
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2015.09.06

摘要

轮状病毒VP8*蛋白由纤突蛋白VP4裂解形成,VP8*蛋白决定了VP4蛋白血清特异性中和反应相关,本试验原核表达UK株牛轮状病毒VP8*多拷贝嵌合肽段,纯化并比较分析其免疫原性.首先根据GenBank上发表的牛轮状病毒UK株VP8*蛋白的编码序列及可能的主要抗原表位区(aa 1～11和aa 218～235),设计并合成引物,以扩增这两个区段的嵌合基因,克隆到原核表达载体pET-28α(+)上,并通过酶切位点连接构建嵌合基因的3拷贝重复重组表达载体,同时构建单拷贝和全长VP8*表达载体.重组载体转化到E.coli感受态细胞中,IPTG诱导表达后,重组蛋白经SDS-PAGE和Western blot证实重组蛋白大小与预期相符且能与His-tag单抗发生特异性反应;ELISA结果表明免疫后3拷贝蛋白较单拷贝蛋白血清抗体水平更高.本试验确定了原核表达的3拷贝嵌合VP8*重组蛋白免疫后具有良好的抗原性,为今后抗轮状病毒疫苗的研制及抗轮状病毒药物的发展提供参考.