PRRSV、PCV2与CSFV多重SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测方法的建立与初步应用

• 作者: 于朋飞 崔保安 郑兰兰 陈红英 韩志涛 高晓平 魏战勇
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪圆环病毒2型 猪瘟病毒 SYBR GreenⅠ
• 年，卷（期）: 2015,（9）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1409-1414,1428
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2015.09.03

摘要

旨在建立一种能快速、灵敏、同时检测出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)与猪瘟病毒(CSFV)3种病毒的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法.参照GenBank中登录的相关基因序列,设计了3对引物分别用于扩增PRRSV ORF7基因、PCV2ORF2基因与CSFV 5'端保守序列的部分片段.将测序正确的3段基因片段分别克隆入pGEM-T Easy载体,转化大肠杆菌DH5α,经测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR标准曲线和溶解曲线,并对其灵敏性、特异性和重复性进行验证.结果表明,PCV2、PRRSV与CSFV荧光定量PCR的标准曲线的Tm值分别为84.6、86.7、89.3℃,溶解曲线特异,灵敏度分别可达181、202、177拷贝/μL,是普通PCR检测方法的100倍.本试验建立的PRRSV、PCV2与CSFV的荧光定量PCR检测方法实现了3种病毒的同时检测,能够对PRRSV、PCV2、CSFV混合感染的临床病料进行快速诊断.