重组人白细胞介素-1α在毕赤酵母中的表达、纯化及生物学活性检测

• 作者: 崔晴晴 徐存拴 李斌 杨亚娟 杨刚刚 许晓亚
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 重组人白细胞介素-1α 毕赤酵母 表达 纯化 人肝癌细胞
• 年，卷（期）: 2015,（9）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 244-250
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.09.035

摘要

在毕赤酵母中分泌表达重组人白细胞介素-1α（rhIL-1α），优化rhIL-1α的发酵工艺及纯化方法，以获得高表达、高纯度具有生物学活性的rhIL-1α。通过PCR扩增获得hIL-1α基因，构建其真核表达载体pPICZαA/hIL-1α，电转化至毕赤酵母X-33，用PCR和SDS-PAGE方法筛选高效表达rhIL-1α的工程菌株并进行Western blot鉴定，DEAE弱阴离子离子交换层析一步纯化表达产物，并用MTT法初步检测其对人肝癌细胞7402的生物学作用。rhIL-1α在摇瓶规模下，经甲醇诱导4 d后表达量约为30 mg/L。Western blot检测rhIL-1α的特异性结合，获得纯度约95%，收率40%左右的rhIL-1α，并证明rhIL-1α能够抑制人肝癌细胞7402的增殖。构建了重组hIL-1α的基因工程菌，并在毕赤酵母中实现了高效表达，为进一步研究其生物学活性和功能奠定了基础。