猪唾液素黏附素胞外区在PRRSV感染PAM细胞中的作用

• 作者: 冯亚琼 崔春晓 张莹莹 李娜娜 杜东颖 杨明凡 杨青原 王冬梅 秦运杰
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 唾液酸黏附素 多克隆抗体 封闭 PRRSV 感染
• 年，卷（期）: 2015,（7）
• 所属期刊栏目: 基础兽医学
• 页码范围: 1112-1118
• 分类号: S852.2|S852.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2015.07.16

摘要

采用新的试验方法制备出纯度较高的抗猪Sn的鼠纯化IgG,并证实此种抗体可以阻碍PRRSV感染PAM,为研究猪Sn各结构域的作用提供参考,为进一步研究PRRSV侵入宿主的作用机制奠定基础.本试验分8个片段克隆猪Sn胞外区功能结构域(第2～17结构域),并分别构建重组表达质粒,转化到BL21进行诱导表达.通过优化蛋白表达条件,制备其重组蛋白,将8种重组蛋白混匀后制成混合抗原(SnE)免疫小鼠以制备其多克隆抗体血清,用间接ELISA的方法检测高免血清的效价,分离并收集血清.采用硫酸铵盐析与DE-52离子交换层析相结合的方法提取并纯化血清,得到纯度较高的鼠抗猪SnE抗体.无菌灌冲猪肺脏收集原代PAM至24孔培养板中,培养6h后,用抗Sn150(第1结构域)、SnE和Sn150+ SnE等抗原的鼠纯化IgG以及鼠阴性IgG和PBS分别处理PAM,1h后用200 CID50 PRRSV感染PAM,分别在感染24、48 h后用已建立的PRRSV实时荧光定量PCR方法检测感染细胞的病毒拷贝数.结果显示,PRRSV感染24 h和48 h时后,鼠抗猪Sn150抗体组的PRRSV mRNA拷贝数与阴性IgG组相比较均差异较小(P＞0.05);而鼠抗猪SnE抗体和Sn150 +SnE混合抗体组的PRRSVmRNA拷贝数均显著低于对应的阴性IgG组,且鼠抗猪SnE抗体组24 h和48 h时PRRSV mRNA拷贝数分别是阴性IgG组的0.75倍(P＜0.001)和0.74倍(P＜0.001),Sn150+ SnE混合抗体组24 h和48 h时的PRRSV mR-NA拷贝数分别是阴性IgG的0.83倍(P＜0.01)和0.76倍(P＜0.001).结果表明,鼠抗猪SnE抗体和Sn150+SnE混合抗体封闭后PRRSV感染PAM的能力降低,且效果显著,提示PRRSV的吸附和内吞作用可能与pSn整个胞外区都有密切的关系.