牛干扰素诱导跨膜蛋白基因的克隆、序列分析及表达

• 作者: 叶飞 朱羿龙 李昌 杜寿文 王茂鹏 谭鹏 辛舒 邢彬 金宁一
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛干扰素诱导跨膜蛋白 序列分析 真核表达
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 371-377
• 分类号: S823
• 语种: 中文

摘要

参照GenBank中牛干扰素诱导跨膜蛋白(bIFITMs)编码序列设计上、下游引物,通过RT-PCR技术扩增目的序列.将扩增产物连接至pMD18-T载体上,测序,使用DNAStar、DNA MAN、MEGA6.0等生物信息学软件对其进行核苷酸、氨基酸序列同源性分析以及关键位点氨基酸比对,并完成进化树的绘制.同时,将测序正确的目的序列进一步亚克隆至真核表达载体pLV-EGFP,转染HEK293T、BHK-21细胞,通过RT-PCR,蛋白免疫印迹(Western blot)验证外源基因在细胞内的表达情况.结果表明,获得bIFITMs编码序列,完成其相关生物信息学分析,同时,成功构建含有bIFITMs编码序列的重组真核表达质粒pLV-bIFITM1、pLV-bIFITM2、pLV-bIFITM3,且在HEK293T、BHK-21细胞中有效表达,为进一步探讨bIFITMs的抗病毒作用以及动物转基因抗病毒育种提供了试验基础.