牛源金黄色葡萄球菌的分离鉴定及ClfA基因的克隆和真核表达载体的构建

• 作者: 侯书宝 张勇 武小虎 王华 胡俊杰 董翔宸 赵兴绪 阚威 马友记
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 奶牛隐性乳房炎 金黄色葡萄球菌 ClfA基因
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1933-1938
• 分类号: S852.61
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2015.12.09

摘要

以研制安全有效的奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌基因工程疫苗为目的,采集380份隐性和临床型乳房炎奶样,经高盐肉汤、过氧化氢酶、甘露醇发酵、三糖铁发酵试验以及Baird-Parker平板对金黄色葡萄球菌进行分离和生化鉴定,PCR扩增分离株凝集因子基因(ClfA)并连接TA克隆载体.经测序确定无误后,连接pcDNA3.1HisB以构建真核表达载体pcDNA 3.1HisB-ClfA,转化Trans T1TM感受态细胞,HindⅢ和XhoⅠ双酶切分析,同时进行测序和序列分析.结果显示,通过高盐肉汤、过氧化氢酶、甘露醇、三糖铁试验和Baird-Parker平板从380份隐性及临床型奶牛乳房炎奶样中共分离到35株金黄色葡萄球菌,成功构建了真核表达载体(pcDNA3.1 HisB-ClfA),为研制金黄色葡萄球菌基因工程疫苗奠定基础.