黔产宽叶缬草ISSR反应体系的建立与优化

• 作者: 周道堂 周镁 覃容贵 钱志瑶 陈祖云 黄秀平
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 宽叶缬草 ISSR 单因素试验 正交设计 体系优化
• 年，卷（期）: 2015,（7）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 69-75
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.07.011

摘要

旨在建立稳定、可靠的宽叶缬草ISSR反应体系.以10个水平单因素试验为基础,应用L16(45)正交设计对反应体系中4个主要因子在4个水平上进行组合优化,并采用直观法、极差法和方差法对试验结果进行分析;利用优化的反应体系,筛选引物以及最佳退火温度;同时,以9份不同产地宽叶缬草样品对反应体系进行稳定性检测.结果显示,宽叶缬草25μL ISSR最佳反应体系为:2.5 μL 10× Taq Buffer,2.0 mmol/L Mg2+,0.28 mmol/L dNTPs,0.3 μmol/L引物,1.75 U TaqDNA聚合酶,60 ngDNA模板,ddH2O补齐;影响大小依次是:Mg2+＞引物＞dNTPs＞Taq DNA聚合酶;确定了各引物的最佳退火温度以及筛选出扩增条带清晰稳定的17条ISSR引物;稳定性实验表明,该体系稳定可靠.优化出宽叶缬草ISSR最佳反应体系并筛选出理想的引物.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	覃容贵	贵州医科大学药学院	23	32	3.0	5.0
2	钱志瑶	贵州医科大学药学院	13	29	3.0	5.0
3	黄秀平	贵州医科大学药学院	6	27	3.0	5.0
4	周镁	贵州医科大学药学院	4	20	2.0	4.0
5	周道堂	贵州医科大学药学院	5	21	2.0	4.0
6	陈祖云	贵州医科大学药学院	1	14	1.0	1.0