6-磷酸果糖激酶-2/果糖双磷酸酶-2同工酶3基因敲除小鼠模型的构建

• 作者: 彭叔彬 李师耿 李骏 温星桥 王喻 王骏 陈延雄 韩飞
• 来源期刊: 中华实验外科杂志
• 关键词: 6-磷酸果糖激酶-2/果糖双磷酸酶-2同工酶3 类转录激活样效应因子核酸酶技术 原核显微注射 基因敲除
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 泌尿外科
• 页码范围: 2986-2989
• 页数: 4页
• 字数: 2415字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2015.12.022

摘要

目的 建立6-磷酸果糖激酶-2/果糖双磷酸酶-2同工酶3(PFKFB3)基因敲除小鼠模型.方法 利用类转录激活样效应因子核酸酶(TALEN)技术,通过构建针对PFKFB3基因的TALEN质粒,并将构建好的TALEN质粒在体外反转录为mRNA.利用原核显微注射分别将0.1μl转录后的浓度为50 ng/μl的mRNA注射到C57BL/6品系小鼠受精卵中,将受精卵回送到ICR代孕母鼠输卵管中,得到F0代基因敲除杂合子小鼠.将F0代饲养至10周龄后合笼,从而构建基因敲除纯合子小鼠.所有子代鼠出生1周后剪尾,提取RNA后反转录,PCR产物作为模板进行基因测序鉴定基因型.结果 通过TALEN技术成功构建了F0代基因敲除杂合子小鼠3只,基因测序结果表明分别于靶基因位置缺失了10、4、1对碱基对;因PFKFB3基因敲除纯合子具有胚胎致死性,6只F1代基因敲除小鼠的基因测序结果显示,针对靶基因,编号4、5的小鼠缺失了1对碱基对,6号小鼠缺失4对碱基对,7、8、9号小鼠缺失10对碱基对.结论 成功构建了PFKFB3基因敲除杂合子(+/-)小鼠.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李师耿	中山大学附属第三医院急诊外科	5	14	3.0	3.0
2	王喻	中山大学附属第三医院泌尿外科	24	50	3.0	4.0
3	韩飞	中山大学附属第三医院泌尿外科	6	8	2.0	2.0
4	王骏	中山大学附属第三医院泌尿外科	9	37	3.0	6.0
5	彭叔彬	中山大学附属第三医院泌尿外科	5	7	2.0	2.0
6	陈延雄	中山大学附属第三医院泌尿外科	2	10	2.0	2.0
7	李骏	中山大学附属第三医院泌尿外科	4	7	2.0	2.0