转染 Smad3-siRNA 的活化肝星状细胞 Smad3表达及细胞外基质分泌量变化

• 作者: 刘丹 李斯 李萍 杨秋辉 江智龙 王俊岭
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 肝星状细胞 Smad3-siRNA真核表达载体 转化生长因子β
• 年，卷（期）: 2015,（35）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 31-33
• 页数: 3页
• 分类号: R575
• 字数: 2730字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2015.35.010

摘要

目的：转染Smad3-siRNA的活化肝星状细胞（ HSCs） Smad3表达及细胞外基质分泌量变化。方法利用生物软件进行Smad3 mRNA模拟，选择合适的靶位点，使用pSilencer3．1-H1-hygro载体表达Smad3特异性siRNA。将Smad3-siRNA真核表达载体转染HSC-T6细胞株，将HSC-T6细胞接种到24孔培养板，待细胞生长融合达60％～80％后，每3孔为1组，共分为4组，HSC-T6组细胞未经过质粒转染；空白质粒组细胞经过不含Smad3-siRNA的空白质粒转染；1μg Smad3-siRNA转染组细胞经过含有1μg Smad3-siRNA的质粒转染；2μg Smad3-siRNA转染组细胞经过含有2μg Smad3-siRNA的质粒转染。应用RT-PCR法、Western blotting法分别检测Smad3 mRNA和蛋白，同时检测细胞上清胶原Ⅲ。结果成功构建siRNA表达克隆。 HSC-T6组、空白质粒组、1μg Smad3-siRNA组、2μg Smad3-siRNA组的Smad3 mRNA相对表达量分别为0．98±0．06、0．98±0．10、0．72±0．10、0．31±0．15，Smad3蛋白相对表达量分别为0．98±0．01、0．96±0．02、0．73±0．03、0．30±0．02，胶原Ⅲ含量分别为33．11±0．45、33．55±1．00、17．93±1．05、11．80±1．31，1μg Smad3-siRNA组、2μg Smad3-siRNA组分别与HSC-T6组比较，1μg Smad3-siRNA组、2μg Smad3-siRNA组分别与空白质粒组比较，1μg Smad3-siRNA组与2μg Smad3-siRNA组比较，P均＜0．05。结论在体外实验中真核表达载体Smad3-siRNA可有效地抑制HSCs中Smad3的表达，并可减少激活的HSCs分泌细胞外基质。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李萍	天津市第二人民医院天津市肝病医学研究所	42	201	9.0	12.0
2	刘丹		25	184	8.0	13.0
3	杨秋辉	天津医科大学研究生院	4	15	2.0	3.0
4	王俊岭	天津医科大学研究生院	7	31	3.0	5.0
5	江智龙		9	48	4.0	6.0
6	李斯		4	20	3.0	4.0