魁蚶过氧化氢酶基因克隆及表达分析

• 作者: 刘志鸿 吴彪 周丽青 孙秀俊 李东明 杨爱国 黄永欢
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 魁蚶 过氧化氢酶 RACE qRT-PCR
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 页码范围: 856-866
• 分类号: Q758|S917.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20151010106

摘要

采用RT-PCR和cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)克隆出魁蚶过氧化氢酶(SbCAT)基因cDNA全长序列,该基因全长为2181 bp,包括1431 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),96 bp的5'端非翻译区(UTR)和654 bp的3'-UTR.其中ORF编码477个氨基酸,预测分子量为54 ku,理论等电点为8.03.SbCAT氨基酸序列与其他所选动物的氨基酸序列具有较高的相似性,其相似度为68％～96％,SbCAT氨基酸具有CAT基因家族的特征性序列,包括CAT活性位点,1个亚铁血红素结合位点及3个催化位点残基.此外,SbCAT还具有保守的亚铁血红素结合口袋与还原型辅酶Ⅱ(NADPH)结合位点.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测了SbCAT的组织表达特征.结果显示,SbCAT mRNA在所检测的6种组织中均有表达,在外套膜中表达量较高,在肝胰腺和红细胞中表达量较低.经鳗弧菌和金黄色葡萄球菌刺激后,鳗弧菌刺激组的外套膜表达量一直较低,其他组织均表现出先上升再下降的趋势.研究表明,SbCAT可能在魁蚶免疫防御中发挥重要作用.