不同pH梯度的IPG胶条对绿竹叶片蛋白双向电泳的比较

• 作者: 何天友 吴玉香 姚旺 沈少炎 荣俊冬 郑郁善 陈礼光
• 来源期刊: 安徽农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 双向电泳 绿竹叶片 蛋白提取 IPG胶条
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 林学
• 页码范围: 749-754
• 分类号: S795.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.13610/j.cnki.1672-352x.20160929.014

摘要

双向电泳(2-DE)技术是研究蛋白组学的有效途径和重要手段,而在双向电泳第一向中使用不同pH梯度的IPG胶条,是对双向电泳技术研究的深入.利用改良的TCA/丙酮与Tris-饱和酚提取法,提取纯度更高的绿竹叶片全蛋白,并在双向电泳中使用不同pH梯度的IPG胶条,检测其对绿竹叶片双向电泳图谱的影响.结果表明,蛋白样品上样量为20 μg时,在7 cm的pH3-10L、pH3-1 0NL、pH5-8L 3种胶条中,pH5-8L的胶条在双向电泳的凝胶图谱上显现的蛋白点数目最多,约有400个,而且蛋白点的分布较其他2个胶条的结果更为均匀,清晰度更高;pH3-10NL的胶条的图谱上显现的蛋白点要比同一跨度的pH3-10L的胶条更多;通过3种胶条的对比可以使绿竹叶片双向电泳的分辨率显著提高.对于在pH5-8L显现出来的4个蛋白点进行MALDI-TOF-MS质谱分析,成功鉴定出4个蛋白点,其中3个蛋白点在pH3-10L胶条的双向电泳中是没有显现出来的,这些蛋白对于植物生物功能的发挥具有意义.试验表明了对于一些低丰度蛋白及小分子量蛋白的检测和鉴定,可以利用pH梯度较小的固化胶条进行双向电泳试验.