家蚕类泛素化翻译后修饰蛋白NEDD8的cDNA克隆、表达分析和亚细胞定位

• 作者: 于洁 唐旭东 徐莉 沈中元
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 家蚕 泛素化 类泛素样蛋白 NEDD8 表达分析 细胞定位
• 年，卷（期）: 2016,（9）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 948-955
• 分类号: Q966
• 语种: 中文
• DOI: 10.16380/j.kcxb.2016.09.004

摘要

[目的]NEDD8是一种重要的蛋白质翻译后修饰蛋白,对底物蛋白的功能具有重要的调节作用.本研究旨在探索家蚕Bombyx mori中NEDD8的功能.[方法]利用RT-PCR技术,从家蚕BmN细胞中克隆了家蚕NEDD8完整的开放阅读框.通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测家蚕NEDD8在不同发育阶段、5龄第3天幼虫不同组织中以及BmNPV感染BmN细胞后的相对表达量.通过构建GFP融合表达的重组BmNPV(B.mori nucleopolyherovirus)感染家蚕BmN细胞,在共聚焦显微镜下观察NEDD8在细胞中分布情况,用GFP抗体进行Western blot验证.[结果]克隆获得了NEDD8基因.序列分析表明,家蚕NEDD8高度保守,与家蚕泛素蛋白氨基酸序列一致性最高.qRT-PCR分析结果表明,NEDD8在家蚕的不同组织中均有表达,其中头部中表达量最高,其次是丝腺中,而在精巢和卵巢中表达量最低;在家蚕5龄第3天幼虫始到化蛹后第3天NEDD8的表达量开始逐渐增加,化蛾后降至低水平;在家蚕杆状病毒感染BmN细胞的早期和极晚期NEDD8的表达量都有明显增加.GFP-NEDD8融合表达定位显示NEDD8在BmN细胞内普遍存在,分布于整个细胞中,并且在感染48 h后存在细胞质内的聚集现象.[结论]NEDD8编码序列在物种间高度保守;NEDD8在家蚕幼虫头部中表达量最高,在化蛹阶段表达量逐渐增加;NEDD8在BmN细胞内普遍存在并且可能与参与BmNPV复制.本研究所得结果为进一步研究NEDD8在家蚕中的生物学功能及修饰底物蛋白的作用机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈中元	江苏科技大学生物技术学院	19	114	8.0	10.0
3	徐莉	江苏科技大学生物技术学院	11	71	6.0	8.0
7	唐旭东	江苏科技大学生物技术学院	18	8	2.0	2.0
11	于洁	江苏科技大学生物技术学院	3	1	1.0	1.0