类泛素化蛋白NEDD8单克隆抗体制备

• 作者: 于婉琪 姚威 孙海伟 萧飒 陈鸿军 霍娜
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 生物学
• 关键词: NEDDylation NEDD8 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 83-88
• 页数: 6页
• 分类号: Q513
• 字数: 4062字
• 语种: 中文

摘要

利用RT-PCR从A549细胞中扩增出类泛素化蛋白编码的nedd8基因,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,测序验证后转化入BL21(DE3)进行IPTG诱导,表达获得NEDD8蛋白,经纯化后,免疫接种6周龄BALB/c小鼠.细胞融合后,用ELISA和Western blot方法筛选单克隆抗体细胞株.结果成功制备获得3株单克隆抗体.免疫特异性鉴定结果表明,所得到的3株单抗适用于Co-IP试验,可以特异性检测NEDD8修饰的Cullin-1底物.通过分段表达鉴定单抗针对的抗原表位可能在29RVEE32氨基酸区域,与泛素化蛋白(Ub)无交叉反应.本研究制备的特异性单抗为进一步鉴定NEDDylation修饰底物提供了良好的抗体工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	霍娜	中国农业科学院上海兽医研究所	3	16	2.0	3.0
3	萧飒	西北农林科技大学动物医学院	6	2	1.0	1.0
4	孙海伟	中国农业科学院上海兽医研究所	7	1	1.0	1.0
5	于婉琪	中国农业科学院上海兽医研究所	3	15	1.0	3.0
7	姚威	中国农业科学院上海兽医研究所	2	0	0.0	0.0