鸡Perilipin1基因启动子的克隆及分析

• 作者: 乔书培 史洪岩 史铭欣 周纬男 王宇祥
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡 脂滴包被蛋白 启动子 克隆 分析
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 249-259
• 页数: 11页
• 分类号: S831.2
• 字数: 6461字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2016.02.006

摘要

旨在研究鸡脂滴包被蛋白基因(Perilipin1,Plin)启动子的结构及特征.本研究采用PCR方法扩增了鸡Perilipin1基因5′侧翼区约2 kb的DNA片段,并对其进行了克隆、测序及生物信息学分析;同时,构建了其全长及系列截短突变的报告基因表达载体,瞬时转染鸡胚成纤维细胞系(DF-1),用双荧光素酶报告基因系统测定了荧光素酶活性,确定了该基因的核心启动子区域.生物信息学分析结果表明,鸡Perilipin1基因的启动子区不存在典型的TATA box结构和CpG岛,但可能存在TFIID、Sp1、AP2、PPAR、RXR、SREBP1、C/EBP、GATA、ER、KLF5 等多个转录因子结合位点;报告基因分析结果表明,本研究克隆的鸡Perilipin1基因启动子能够极显著地启动报告基因的表达(P＜0.01),并且随着启动子片段由5′端逐渐截短,报告基因活性表现出逐渐增强的趋势,其中-360/-11片段具有最强的报告基因活性.综上表明,鸡Perilipin1基因-360/-11区域的启动子片段具有最强的转录活性,包含该基因的核心启动子序列.