shRNA沉默TRAF6基因对急性肝损伤小鼠炎症反应的影响

• 作者: 何生松 庞然 张芙蓉 董继华 许娟娟 陈锋
• 来源期刊: 华中科技大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: TRAF6 RNA干扰 TLR4 信号通路 NF-κB 急性肝衰竭
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 278-283,310
• 页数: 7页
• 分类号: R657.3
• 字数: 5825字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-0741.2016.03.008

摘要

目的：通过 shRNA 沉默肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumour necrosis factor receptor associated factor 6, TRAF6)基因表达,研究TRAF6沉默基因对内毒素/D-氨基半乳糖(LPS/D-GalN)诱导的急性肝衰竭小鼠炎症反应的影响。方法通过体外实验筛选针对TRAF6基因的最有效小干扰 RNA(siRNA)序列,采用流体力学注射法将 pTRAF6-shRNA表达质粒转染BALB/c小鼠,24 h后重复注射1次。第2次注射后24 h,予 LPS/D-GalN 腹腔注射制备急性肝衰竭内毒素炎症模型。设正常对照组、模型对照组、空白质粒/LPS组及 RNAi/LPS组。观察各组小鼠肝脏病理变化, Real-time PCR检测TRAF6、IL-6及COX-2 mRNA的表达,ELISA检测血清 TNF-α、IL-1β及 TGF-β1水平变化,West-ern blot检测肝细胞TRAF6、NF-κB p65的表达。结果 Real-time PCR及Western blot检测显示,pTRAF6-shRNA1能有效沉默TRAF6 mRNA 及蛋白表达,其中 TRAF6 mRNA 表达较正常小鼠下降约60.13%,TRAF6蛋白表达降低约52.08%,差异均有统计学意义(均P<0.01)。ELISA检测显示各组小鼠TNF-α、IL-1β均于造模后8 h达到峰值,TGF-β1于16 h达到峰值；RNAi/LPS组小鼠血清 TNF-α、IL-1β及 TGF-β1水平明显低于同时间点模型对照组。Real-time PCR结果显示 RNAi/LPS组小鼠IL-6、COX-2及TRAF6 mRNA表达下降,与模型对照组比较差异均有统计学意义(均P<0.01)。Western blot 结果显示 RNAi/LPS 组小鼠肝组织总蛋白 NF-κB p65表达水平显著高于正常对照组(P<0.05),与模型对照组无差异,而胞核 NF-κB p65明显低于模型对照组(P<0.05)。结论 pTRAF6-shRNA可能通过下调 NF-κB p65水平,抑制炎症相关细胞因子和炎性介质表达水平,从而减轻内毒素/半乳糖诱导的小鼠急性肝损伤。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	董继华	华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室	70	396	11.0	16.0
2	何生松	华中科技大学同济医学院附属协和医院感染科	45	211	8.0	11.0
3	陈锋	武汉市妇女儿童医疗保健中心武汉市儿童医院重症医学科	1	2	1.0	1.0
4	张芙蓉	武汉市妇女儿童医疗保健中心武汉市儿童医院重症医学科	1	2	1.0	1.0
5	庞然	华中科技大学同济医学院附属协和医院感染科	13	83	6.0	8.0
6	许娟娟	华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科	32	157	7.0	11.0