毛蚶抗癌活性蛋白对K562细胞增殖和凋亡的影响

• 作者: 付莹 孙震晓 林华英 赵晨
• 来源期刊: 中国药理学与毒理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 毛蚶抗癌活性蛋白组分 K562细胞 细胞凋亡 细胞周期 胱天蛋白酶3
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 221-228
• 页数: 8页
• 分类号: R285.5|R979.1
• 字数: 3781字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3867/j.issn.1000-3002.2016.03.007

摘要

目的：考察毛蚶抗癌蛋白（ASAP）活性组分体外对人慢性粒细胞性白血病K562细胞的细胞毒作用，初步探讨其作用机制。方法 ASAP由毛蚶软体经常规低温水提和硫酸铵沉淀法制备；Bradford法测定ASAP样品的蛋白质浓度，计算蛋白质含量；倒置相差显微镜下观察ASAP作用后K562细胞形态变化，姬姆萨染色观察细胞和细胞核的变化；MTT法检测ASAP对K562细胞存活的影响；流式细胞术检测细胞凋亡和周期的变化；Western蛋白质印迹法检测细胞凋亡和细胞周期相关蛋白胱天蛋白酶原3（35 ku），胱天蛋白酶3（17 ku），程序性细胞死亡因子4（PDCD4）和P53的表达。结果 MTT实验结果表明，ASAP 50，100和200 mg·L-1作用24~72 h对K562细胞增殖具有明显的抑制作用，呈时间和浓度依赖性，24，48和72 h的浓度-效应相关系数分别为0.851，0.8977和0.8997（P<0.01）。镜下观察发现，ASAP 200 mg·L-1作用48 h， K562细胞出现变形或核碎裂等形态变化。流式细胞术结合姬姆萨染色显示，ASAP可浓度依赖性地引起K562细胞凋亡和G2/M期阻滞，其中ASAP 200 mg·L-1处理48 h，K562细胞早期凋亡率为（32.8±0.1）％〔对照组（3.7±1.1）％〕（P<0.01），晚期凋亡率为（31.2±2.2）％〔对照组（9.9±0.8）％〕（P<0.01）；G2/M期细胞为（55.2±1.7）％〔对照组（15.3±0.8）％〕（P<0.01）。Western蛋白质印迹法实验结果显示，ASAP作用0~40 h， K562细胞中胱天蛋白酶原3（32 h时）明显下调（P<0.01），胱天蛋白酶3表达明显增加（P<0.01），而随着ASAP作用时间的延长，PDCD4和P53蛋白表达均下调（P<0.01）。结论诱导K562细胞凋亡和G2/M期阻滞可能是ASAP细胞毒作用的主要机制；ASAP诱导的细胞凋亡是胱天蛋白酶3通路依赖的，诱导K562细胞凋亡和G2/M期阻滞可能与PDCD4和P53蛋白表达下调相关。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙震晓	北京中医药大学中药学院	52	473	12.0	20.0
2	赵晨	北京中医药大学中药学院	7	30	4.0	5.0
3	付莹	北京中医药大学中药学院	4	15	3.0	3.0
4	林华英	中国海洋大学海洋生命科学学院	3	15	3.0	3.0